Клеточные источники «патогенного» интерлейкина-6 при заболеваниях: сравнение результатов генетических подходов и антицитокиновой терапии нового типа.
Основные результаты проекта
Получение панели мышей с тканеспецифической инактивацией IL-6:
Мыши с тканеспецифической инактивацией цитокинов в наше время являются незаменимым инструментом для изучения причин, механизмов развития различных заболеваний и поиска новых подходов к их терапии. Поскольку IL-6 является ключевым участником в развитии аутоиммунных и раковых заболеваний, мы задались целью создать уникальную панель мышей с тканеспецифическим нокаутом этого цитокина в разных типах клеток. Это позволит изучить вклад IL-6 из каждого типа клеток в развитие конкретных заболеваний на соответствующих мышиных моделях. От коллабораторов (Dr. Juan Hildago (Автономный Университет Барселоны, Испания)) мы получили линию мышей с флоксированным геном IL-6 (IL-6floxed). Этих мышей мы скрестили с имевшимися в нашем распоряжении ранее, а также с новыми полученными Cre-делиторами, в результате чего получили уникальную панель мышей с тканеспецифической инактивацией IL-6, в том числе индуцибельной (мыши с индуцибельной Cre разработаны и любезно переданы нам нашими коллегами из Берлина, Германия под руководством Ш. Юнга). В связи с длительностью процесса пересылки мышей и их последующего скрещивания с Cre-делиторами, в течение выполнения проекта нам удалось только получить эти мышиные линии и начать их характеристику в моделях человеческих заболеваний, таких как аллергическая астма, рассеянный склероз и рак кожи. Мы рассчитываем продолжить работу в этом направлении при дальнейшей поддержке РНФ.
Получение панели мышей с тканеспецифической экспрессией IL-6 человека:
Для более полного изучения роли IL-6, продуцируемого различными типами клеток, а также для проверки в мышах его потенциальных блокаторов, которые могут быть использованы в клинике, мы решили разработать мышиную модель тканеспецифической экспрессии человеческого IL-6. До нас только группа ученых из Майнца, Германия под руководством А. Вайсмана разработали похожую мышиную линию, однако они использовали мышиный IL-6. Для получения мышей с тканеспецифичной экспрессией человеческого IL-6 мы начали с нуля, полностью разработали необходимую таргетную конструкцию и произвели трансгеноз с помощью колллег из Центра коллективного пользования Института биологии гена РАН «Биология живой клетки и биомедицинские нанотранспортеры лекарств». Нами уже были получены первые мыши с селективной экспрессией человеческого IL-6 в миелоидных клетках, которые показали сильный воспалительный фенотип вплоть до летального исхода. В связи с этим мы решили перейти к индуцибельной экспессии человеческого IL-6 в миелоидных клетках, соответствующие мыши находятся на стадии скрещивания.
Получение биспецифических антител к IL-6:
Наша группа является одним из лидеров в разработке биспецифических блокаторов цитокинов из конкретного клеточного источника. Недавно мы разработали прототип такого блокатора для TNF(Efimov GA et al., PNAS, 2016, 113(11):3006-11). В этом проекте мы взялись за амбициозную задачу получения аналогичного конструкта для блокировки IL-6. В ходе выполнения проекта мы разработали генетическую конструкцию, кодирующую биспецифическое антитело, способное связывать IL-6 человека и маркер макрофагов F4/80. IL-6-распознающий модуль в этом реагенте был получен нами из одноцепочечных антител верблюда. Мы также рассматриваем возможность получения биспецифического конструкта путем химической конъюгации более охарактеризованного антитела к человеческому IL-6 (клон MP5-20F3), для которого показана блокирующая активность. Мы планируем в дальнейшем проверить полученные конструкты в отработанных нами ранее мышиных моделях человеческих заболеваний. В случае успеха, они могут стать новыми перспективными терапевтическими агентами в лечение заболеваний человека.
